應用范圍:
該試劑盒在冰凍切片的免疫熒光染色中表現出的性能。
產品優點:
1、操作簡單,重復性好;
2、較傳統方法能獲得更高信噪比科研圖片;
3、節省抗體用量,比傳統方法節約20%-40%抗體用量;
4、節約科研時間,只需要30分鐘,比傳統方法實驗速度提高約10倍;
操作步驟:
1、1、將組織浸泡入固定液中(TIF-1),4℃固定24小時。(對于那些需要進行灌注的動物:緩慢的用生理鹽水灌注直到流出的生理鹽水變澄清,然后快速的將組織取出進行固定操作)
2、再將組織浸泡在組織孵育緩沖液中(TIF-2),4℃孵育48小時。
3、將組織冰凍切片成10-20um的厚度,然后貼片到已經用多聚賴氨酸包被的載玻片上,置切片到-20℃或-80℃保存待用。
4、在常溫下,用試劑盒組分封閉液(TIF-3)將一抗和二抗稀釋成一抗和二抗抗體工作液。
5、在常溫下,用試劑盒組分洗滌液A(TIF-4)孵育組織10min,然后用300ul洗滌液B(TIF-5)洗滌2次。
6、用150ul一抗抗體工作液,4°C孵育組織過夜,然后用洗滌液B(TIF-5)洗滌組織3次,每次用300ul。
7、用150ul二抗抗體工作液,常溫下孵育組織10min,然后用洗滌液B(TIF-5)洗滌組織3次,每次用300ul。(二抗操作,需要避光,以減少熒光淬滅。)
8、封片劑封片,待干后顯微鏡成像。